R718 miRNA First-strand cDNA Synthesis Kit

• 制品组成及包装量

组分	R718 25 rxn (20 μl/rxn)
miRNA RT Enzyme Mix	50 μl
2×miRNA RT Reaction Buffer	250 μl
miRNA qPCR 3’primer (10μM)	625 μl x2
RNase free H2O	1 ml

• 制品简介

       本试剂盒采用加A法来进行miRNA第一链cDNA的反转录。具体过程是先通过E.coli Poly(A) Polymerase在miRNA 3’末端加多聚A尾Poly(A)，再使用Oligo(dT)-Universal Tag通用逆转录引物进行逆转录反应，最终生成miRNA对应的cDNA第一链。
       本试剂盒采用特殊优化预混合miRNA RT Enzyme Mix将Poly(A)加尾和反转录合并为一步完成，简化了操作步骤并提高了Poly(A)加尾和逆转录效率。该试剂盒具有可从20 pg-2 μg的Total RNA中有效制备miRNA对应的cDNA第一链。一次合成的cDNA可检测多个microRNA，节约了样品和成本。
       本试剂盒中的2×miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反应和反转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证miRNA 3’末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。
注：本试剂盒包含后续qPCR检测所需引物miRNA qPCR 3’primer。。

• 储存条件

       -20℃保存。

• 适用范围

       miRNA第一链cDNA合成。

• 实验例

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采用本试剂盒进行荧光定量RT-PCR检测血浆miR-16-5p（Sequence：uagcagcacguaaauauuggcg）和夏至草miR166a（Sequence：ucggaccaggcuucauucccc）。荧光定量反应使用NOBELAB 2× SYBR Premix UrTaq^TM II（货号R601），获得的cDNA模板梯度稀释后分别加入反应液中。结果如图A和B，扩增曲线线型标准，可在宽广的范围内完成反应，溶解曲线峰型单一、无杂峰，扩增特异性强。